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Protocolo para la extracción de puntos de corte de ADN?

Protocolo para la extracción de puntos de corte de ADN?


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¿Existe algún método para hacer el enriquecimiento desplegable de los puntos de ruptura del ADN de una célula? Encontré este artículo que informa un método para enriquecer los puntos de ruptura de una sola hebra de ADN a partir de eventos de recombinación meiótica:
Khil PP, Smagulova F, Brick KM, Camerini-Otero RD, Petukhova GV. 2012. Mapeo sensible de puntos calientes de recombinación usando detección de ssDNA basada en secuenciación. Investigación del genoma 22: 957-65.

Me gustaría saber si hay algo así que funcione en cualquier estado del ciclo celular, no solo en la meiosis.


El artículo que cita dice que los puntos de ruptura son ADN monocatenario que tienen proteínas específicas unidas a ellos.

No soy un experto aquí, pero si esa es la causa de los puntos de ruptura meitóticos, hay algunas posibilidades interesantes para detectarlos:

podría detectarlos con una matriz de ordenamiento en teselas. - eso es un microarreglo que tiene un oligómero cada 40 pb aproximadamente del genoma. La matriz podría usarse en un experimento de CHP que detecta las mismas proteínas que en este artículo.

Es posible que la matriz también pueda hibridar el ADN monocatenario del genoma si las condiciones fueran las adecuadas. Sin embargo, esto suena ruidoso.

En el lado económico, podría ser posible usar la PCR para copiar el ADN monocatenario de una preparación de ADN cromosómico. si los oligos que utiliza están etiquetados con estreptavidina, por ejemplo, puede aislarlos, amplificarlos y secuenciarlos de forma económica.

cualquiera de estos suena como un buen trabajo :)


La respuesta es sí, no solo meiótico, sino que cualquier ruptura de doble hebra del ADN se detectará siempre que se procese mediante recombinación homóloga. Este método (SSDS) se basa en la detección de extremos de ssDNA resecados en DSB. La única diferencia para las rupturas mitóticas será que no puede usar anti-DMC1 para ChIP. En su lugar, debe usar anti-Rad51 o anti-RPA en ChIP.


Ver el vídeo: COVID 19. EFECTOS SECUNDARIOS GRAVES Y A LARGO PLAZO DE LAS VACUNAS. INFERTILIDAD, MUTACIÓN DEL ADN (Septiembre 2022).


Comentarios:

  1. Zulushicage

    Hay algo en esto. Muchas gracias por la información, ahora no cometeré semejante error.

  2. Tylar

    Es una frase bastante valiosa

  3. Jered

    Además, ¿qué en ese caso es necesario hacer?



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